RCAS(A)レトロウイルスのマイクロインジェクションのためのニワトリレンズの作製

まず、ホウケイ酸ガラスのキャピラリーを手動垂直マイクロピペットプーラーのゴム製クッション付きクリップに取り付けます。マイクロピペットプーラーの加熱温度を摂氏950度に設定し、プレプルを行うことで、より薄く、より柔らかいガラスキャピラリーが得られます。次に、加熱温度を摂氏790度に設定し、二次プルを実行して最終的なマイクロピペットを製造します。

マイクロピペットグラインダーを使用して、先端の開口部を外径11マイクロメートルに慎重に研ぎます。次に、マイクロピペットをガラス瓶の内側のスポンジクランプパッドに入れます。受精した鶏卵を、摂氏37度の加湿ロッキングインキュベーターで発育段階18まで孵化させます。

作業領域を70%エタノールで完全に拭き取ります。発育後、卵をインキュベーターから取り出します。卵に70%エタノールをスプレーし、自然乾燥させます。

次に、大きい方の端を上に向けて卵を卵ホルダーに置きます。鋭い歯の鉗子を使用して、卵殻の大きい方の端を慎重に軽くたたき、直径2センチの穴を作ります。次に、卵の殻の破片を取り除きます。

卵子を解剖顕微鏡ステージに置き、胚を見つけます。次に、細かい解剖鉗子とハサミを使用して、胚の上部を覆う羊膜を切り取ります。次に、卵の開口部に60ミリメートルのシャーレを置きます。