マウス膵臓窓手術

まず、麻酔をかけたマウスを加熱された手術用スタンドの右側に置き、左腹部を露出させます。マウスの前端と後肢を紙テープで固定し、脾臓の視認性を確保します。次に、消毒剤をたっぷりと塗って手術部位の皮膚を消毒します。

つま先をつまんでマウスに麻酔が完全にかかっていることを確認します。鉗子を使用して左上腹部の皮膚を持ち上げ、カストロビエホハサミを使用して皮膚と筋肉層に10ミリの円形の切開を行います。脾臓に付着している膵臓を見つけて、クロスステッチを配置する方向を決定します。

5/0シルク縫合糸を使用して、識別された位置の筋肉層に最初のステッチを配置します。端を3〜5ノットで固定します。切開部を直接縫い続けます。

次に、約5センチの尾を切って残します。ステッチを繰り返し、今度は元のステッチに垂直にします。次に、膵臓を慎重に持ち上げてクロスステッチの上に配置します。

穴から約1ミリのところに巾着のステッチを入れ、皮膚と筋肉の層を織り交ぜます。円形の切り込みエッジが窓の溝内に配置されるように窓枠を配置します。次に、5/0シルクをしっかりと縛って、埋め込まれた窓を固定します。

100マイクロリットルの液体シアノアクリレート接着剤を10mmのシリンジにロードします。組織に向かって約10秒間、圧縮空気の繊細な流れを当てて乾かします。鉗子を使用して、窓枠の外縁をつかみ、慎重に持ち上げて、膵臓が窓枠の根元から確実に分離されるようにします。

膵臓組織を避けて、窓のくぼみに沿って液体シアノアクリレート接着剤の薄層を分注します。次に、バキュームピックアップを使用して、5ミリメートルのカバースリップを持ち上げます。カバースリップを光学窓枠の中央にそっと置き、接着剤が固まるまで約25秒間光圧を維持します。

鉗子を使用して、カバースリップをバキュームピックアップから取り外します。次に、クロスステッチ縫合糸を締めて膵臓をカバースリップに固定し、縫合糸の端を切ります。最後に、マウスからテープをはがします。

イソフルラン気化器のスイッチを切り、マウスを清潔なケージに移します。膵臓組織の横方向および軸方向の安定性の増加は、沈降期間後に観察されました。.SWIPによるイメージングでは、腹部および膵臓のイメージングウィンドウと比較して、ドリフトのレベルが低いことが示されました。

マウス膵臓の連続画像検査は、セルレイン治療後に実施した。小葉の移動は2日連続で観察された。SWIPは長期イメージングにも使用でき、液胞の運動性の可視化と定量化を可能にします。

例えば、マウス膵臓の液胞の平均速度は、PBSと比較して、セルレイン治療後に約10%増加しました。また、セルリン処理により、細胞内構造の平均回転頻度が10%増加したが、正味速度、指向性、累積距離に有意差は認められなかった。SWIPは、腫瘍細胞の移動を可視化し、捕捉することができます。

腫瘍細胞の集団クラスター細胞遊走が短期間で観察された。腫瘍細胞とマクロファージの単一細胞遊走も観察されました。