まず、自動化ワークステーションをセットアップします。optoPlateなどのマイクロプレート照明装置を組み込むことで、ロボットグリッパーアームへのアクセスに便利です。次に、使用可能な MATLAB スクリプトを使用してスプレッドシートを処理し、optoPlate をプログラムします。
optoPlateにフラッシュして光刺激プログラムを実行します。ロボットをプログラムするには、潜在的なエラーをトラブルシューティングして、キャリアとLabWareの定義が正しく機能することを確認します。空のプレートをスクリプトループに複数回通し、ロボットグリッパーアームがプレートを正確にピックアップして配置する能力を確認します。
次に、プレートからコロニーを選択して、サンプルプレートをセットアップします。次に、ガラス培養チューブ内の3ミリリットルの合成完全培地に接種します。これらの培養物を、暗闇の中でローラードラム上で摂氏30度で一晩インキュベートします。
キュベットでは、200マイクロリットルの培養液を1ミリリットルの合成完全培地で希釈します。分光光度計を使用してその光学濃度を記録します。次に、ガラス培養チューブで各一晩培養液を光学濃度0.1に希釈します。
希釈した培養液を96ウェルプレートにピペットで移します。ネガティブコントロールとして、ブランク培地および非蛍光細胞を含むウェルを含めます。サンプルプレートをシェーカーインキュベーターで摂氏30度で5時間インキュベートします。
次に、サンプルプレートをヒーターシェーカーに置きます。[実行] をクリックして、自動化スクリプトを開始します。最初の測定値がプレートリーダーに記録されたら、照明装置の電源タップをオンにして光刺激プログラムを開始します。
光遺伝学的株の経時的な蛍光値は、全体的な蛍光レベルが光刺激のデューティサイクルに比例することを示しました。対応する光学濃度値は一貫しており、成長はさまざまな光条件の影響を受けないことが示唆されました。光遺伝学的株が異なれば、光パルス強度、周期、デューティサイクルの変動に対する応答も異なっていました。
