Manufacturing Chimeric Antigen Receptor T-Cells Using an Automated Cell Processor

まず、装置の電源を入れ、タッチスクリーンインターフェースからT細胞形質導入プロセスを選択します。「実行」をクリックして手順を開始し、画面の指示に従います。外周入力画面で、オペレーターのイニシャル、チューブセット、ロット番号、有効期限を入力します。

次に、プロセス設定画面でフルプロセスを選択します。次に、CD4、CD8選択法用の選択試薬のバイアルを2つ選択します。チューブセットを取り付け、すべてのルアー接続がしっかりと設定されていることを確認し、タッチスクリーンの指示に従って上部と下部の完全性テストを完了します。

次に、画面上のガイダンスに従って培地と処理バッファーバッグを取り付け、チューブセットの自動プライミングを開始します。トランスファーセル製品の画面が表示されたら、解凍したTセル製品を150ミリリットルのトランスファーバッグに移し、チューブセットのアプリケーションバッグに滅菌溶接します。次に、品質管理パウチを使用してアプリケーションバッグからサンプルを採取し、血液分析装置を使用して細胞カウントを行います。

CD4およびCD8試薬バイアルをチューブセットに接続し、T細胞濃縮の選択プロセスを開始します。濃縮後、選択した細胞のサンプルを再塗布バッグの品質管理パウチから取り出します。希望の細胞濃度と開始数を入力します。

次に、画面の指示に従って活性化試薬のバイアルを取り付けます。次に、二酸化炭素濃度を5%、培養室温度を摂氏39度に設定します。強化された給餌プロトコルを出発点として使用して活動マトリックスを確立し、個々のステップを特定の最適化されたプロトコルに変更します。

この場合、形質導入活性時間を播種後24時間、培養洗浄時間を形質導入後48時間に設定してください。培養洗浄開始から30分後に開始するようにアクティブシェーカー時間を設定します。中袋交換とごみ袋交換は不要になったため、削除します。

次に、画面の[OK]を押して栽培を開始します。装置が再塗布バッグから培養チャンバーに必要な容量を自動的にポンプで送るのを待ちます。計算したベクター容量を20ミリリットルの試薬バッグに冷たい培地を入れて解凍し、最終容量が10ミリリットルになるように調製します。

活動マトリックスを調整して形質導入時間を2分後に設定し、OKを押して形質導入活動を開始します。画面の指示に従って、ベクターバッグをチューブセットに滅菌溶接します。実際の形質導入開始時間に合わせて活性マトリックスを修正し、形質導入の 48 時間後に培養洗浄をスケジュールします。

培養洗浄後30分後にアクティブシェーカーの時間をスケジュールします。最後に、メディア交換が 6 日目の午後 2:00 PM に行われるようにします。サンプルボタンを押し、画面の指示に従って、活性培養から品質管理サンプルを取得します。

サンプルを 1 ミリリットルのアリコートを 3 つに分けて、さまざまな分析を行います。最終的な製剤緩衝液を調製し、後で凍結保護剤を調製するために一部を保存します。次に、アクティビティ マトリックスを調整し、培養の終了を 2 分後に設定します。

最終調合バッファーをチューブセットに付着させ、回収を開始します。ターゲットセルバッグを密封して取り外します。このバッグには、注入または凍結保存の準備ができているCAR-T細胞が含まれています。

臨床試験のRTランは46%であり、これはTCTプロセスが効果的に細胞増殖を促進したことを示しています。最終産物の細胞生存率は88〜94%であり、CD3 T細胞の純度は89〜93%であったエンドトキシン、マイコプラズマ、不妊性、複製能力のあるレンチウイルス、および残留白血病細胞は検出されなかった。