Virus-Infected Potato Plant Preparation for Microscopic Lesion Recording

まず、ウイルスに感染したジャガイモを摂氏22度に保たれた成長室に移します。観察する植物を選び、粘着テープを使用して2枚目の接種した葉を完全に固定します。次に、デジタルマイクロスコープをコンピューターに接続し、画像キャプチャソフトウェアを起動します。

葉を顕微鏡の下に置きます。次に、ダイヤルを使用して葉の表面に焦点を合わせます。カメラの設定を調整するには、[設定]ボタンをクリックします。

次に、明るさを 64 に、コントラストを 14 に、色相を 0 に設定します。次に、ホワイトバランスを調整します。次に、彩度を 47 に、シャープネスを 0 に、ガンマを 5 に設定します。

画像キャプチャアイコンをクリックし、[タイムラプスビデオ]オプションを選択します。次に、15分ごとに合計24時間の画像キャプチャを設定します。スタートボタンを押して、画像キャプチャを開始します。

キャプチャした画像を保存するには、すべての画像を選択して[保存]アイコンをクリックします。次に、エクスポートオプションを選択します。次に、ドット/インチを最大に設定します。

保存したら、プログラムからすべての画像を削除します。画像を編集するには、ImageJなどの編集ソフトウェアを起動します。「ファイル」をクリックし、「インポート」を選択し、「画像シーケンス」を選択して、1 つの視野から画像の時系列をインポートします。

保存した写真のディレクトリのパスを貼り付けて、[OK]を押します。変換が完了すると、ImageJ は自動的に内部ビデオプレーヤーを起動し、完成したビデオを表示します。[ファイル]、[名前を付けて保存]の順にクリックし、AVI形式を選択してビデオファイルをエクスポートします。

小さなウィンドウが開いたら、フレームレートを0.3 FPSに設定し、[OK]を押してビデオをAVIファイルとして保存します。少なくとも3〜4枚の葉が完全に発達した3〜4週間齢の接種ジャガイモをデジタル顕微鏡分析に使用しました。接種した葉の同じ領域を15分間隔で観察し、病変の発生と経時的な拡大を決定しました。

14時間の観察では、病変は見られませんでした。約90分後、目に見える病変が記録されました。病変は2時間後に拡大し始め、その後8時間半にわたって拡大を続けた。