Electroporation of Agrobacterium tumefaciens for Genetic Engineering of Microalgal Cells

まず、50マイクロリットルの電気コンピテントアグロバクテリウム・ツメファシエンス細胞を、事前に冷却した0.1ミリメートルのQ-vetに加えます。2マイクロリットルのpCAMBIA1302をQ-vetに加えます。次に、2、400ボルトのエレクトロポレーターを使用して、セルを電気ポレーションします。

ただちに 1 ミリリットルの LB 培地を Q-vet に加え、溶液を上下にピペットで移し、穏やかに混合します。次に、再懸濁した細胞を1.5ミリリットルのマイクロチューブに移します。その後、摂氏24〜30度で最低1時間インキュベートして回復させます。

次に、抗生物質を添加したLBオーガーに細胞をプレーティングします。プレートを摂氏28〜30度で2〜3日間インキュベートします。最後に、LBブロスに単一のコロニーを接種します。

文化が一夜にして成長するのを許してください。次に、プラスミド含有株を50%グリセロール溶液で摂氏80度で凍結保存し、将来の使用に備えます。