培養ウェルを調製するには、24ウェルプレートの蓋にドナーコードAまたはB、日付、用量を印を付けます。液体窒素からヒトの血液が入ったクライオバイアルを取り出し、小さな氷の結晶が見られるまで温水浴で部分的に解凍します。次に、層流フードで、バイアルを慎重に開いて、気泡がチューブ内にこぼれないようにします。
バイアルの内容物を再懸濁し、15ミリリットルの遠心チューブに移します。チューブを静かに渦巻きさせながら、1ミリリットルの予熱したPBSを滴下します。P-1000ピペットを使用してPBSと血液を混合します。
希釈して均一に洗浄するには、予熱したPBSを7ミリリットルの15ミリリットルのチューブに加え、ピペッティングで混合します。血液を180gで8分間遠心分離します。その間、24ウェルプレートのラベルのないウェルに500マイクロリットルのPBSを充填し、プレートを摂氏37度で予熱します。
遠心分離後、上清を慎重に取り除き、パレットを乱すことなくチューブ内に約1ミリリットルを残します。ピペットを使用して、パレットを残りの上清に再懸濁します。次に、前述したように、8ミリリットルの温かいPBSをチューブに徐々に加えます。
再懸濁した血液を遠心分離します。その間に、200マイクロリットルのRPMI培地をマークされたウェルに加え、図のようにプレートを予熱します。遠心分離後、上澄み液を除去し、約80マイクロリットルの上清を残します。
次に、280マイクロリットルの子牛胎児血清を追加し、パレットを再懸濁します。180マイクロリットルの細胞懸濁液をマークされたウェルに移します。プレートを二酸化炭素インキュベーターで摂氏37度で10分間インキュベートします。
