マウス注射のための正常酸素および低酸素性ヒト胎盤由来の小細胞外小胞の単離

滅菌鉗子を使用してヒト胎盤サンプルの外植片の抽出を開始するには、胎盤の基底板から血栓を慎重に取り除きます。約10グラムの最終的な組織抽出が得られるまで、小さな外植片を抽出します。外植片を洗浄して培地に再懸濁した後、再懸濁した外植片を2つの100mm培養皿に分割します。

皿の1つを摂氏37度の標準的な標準酸素条件に置き、酸素8%と二酸化炭素5%を入れます。もう一方の皿を1%酸素の低酸素チャンバーに入れます。外植片を2つの異なる条件下で18時間培養した後、15ミリリットルのチューブで外植片の馴化培地を収穫します。

正常酸素および低酸素の外植片培養物から培地を別々のチューブに回収します。回収した馴化培地を室温で逐次遠心分離します。遠心分離のたびに、20〜100マイクロリットルのピペットを使用して、ペレットを廃棄しながら上清を慎重に回収します。

最後に採取した上清に対して、さらに遠心分離を1回行います。得られた胎盤、小さな細胞外小胞、またはSEVを含むペレットを500マイクロリットルのPBSに再懸濁し、懸濁液を0.22ミクロンのフィルターに通します。これで、胎盤由来のSEVをマウスに注入する準備が整いました。