まず、予熱したダルベッコのモディファイドイーグル培地70ミリリットルを滅菌バイオセーフティキャビネットのペトリ皿に移し、100ナノモルの濃度でデキサメタゾンを加えます。解剖に必要な手術器具を組み立てます(滑らかでまっすぐで細い先端鉗子を含む)。鋸歯状の歯とまっすぐで鋭い細いハサミを備えたまっすぐな細い先端の鉗子。
後肢の外植片を解剖する。安楽死させたマウスの股関節をベンチトップに仰向けに置き、吸収剤の下パッドで裏打ちします。細いハサミを使用して、上肢の近位部と前部を覆う皮膚に小さな切開を作成します。
次に、指を使って切開部を引き離し、露出した上肢を広げてつまみます。皮膚を遠位に慎重に引っ張って、後肢を足首の高さまで手袋を外します。片方のはさみの刃を足の背側に沿って皮膚の下にそっと挿入します。
次に、つま先に向かって切開し、完全に取り除かれるまで皮膚を遠位に引っ張り続けます。足首付近の踵骨の後部にアキレス腱が挿入されているのがはっきりと見えるようにマウスを配置します。植物テラス腱を除去するには、滑らかな細い先端鉗子の1つの先端を2つの腱の間に挿入します。
先端を足底腱の内側に通します。次に、それを近位に引っ張って足底筋を引き裂きます。次に、先端の鋸歯状の鉗子を使用して、足底腱の剥離した近位端をつかみ、遠位に引っ張って完全に除去します。
股関節では、細いハサミを使用して骨盤を正確に切断し、後肢を分離します。ハサミを使って残りの骨盤をそっと取り外し、大腿骨頭を露出させます。バイオセーフティキャビネットで、後肢の外植片を細胞培養培地とデキサメタゾンの入った皿に移します。
皿をインキュベーターに移し、48時間前処理します。
