まず、接種ループを使用して、YPDプレートからカンジダアルビカンスのモノクローナルコロニーを選択します。コロニーを5ミリリットルのYPD液体培地に移し、1ミリリットルあたり50マイクログラムのカルベニシリンを添加します。セルを摂氏30度で220RPMの一定速度で一晩振とうします。
次に、細胞懸濁液を400gで室温で5分間遠心分離します。上清を廃棄した後、細胞を通常の生理食塩水に再懸濁し、細胞懸濁液の濁度を0.5マクファーランド標準に一致させて細胞濃度を調整します。0.9%の生理食塩水を作成するには、0.9グラムの塩化ナトリウムを計量し、100ミリリットルの脱イオン水に溶かします。
次に、手術器具をチタンニッケル合金ワイヤーで摂氏121度で30分間オートクレーブしてから使用します。次に、30匹の雄のC57BL/6マウスを対照ブランクインプラント群とPJI群にランダムに分けます。マウスに麻酔をかけた後、左後肢の毛を取り除き、剃った部分をヨウ素で消毒します。
矯正反射の喪失を観察して麻酔の深さを確認します。対照群のマウスには、治療を施さないでください。ブランクインプラントとPJI群のマウスの場合、10番のブレードを使用して、左後肢の膝に5ミリメートルの縦方向の切開を行い、さらなる処置のために関節を露出させます。
次に、滅菌注射針を挿入して、大腿骨髄内管に長さ5ミリメートルの穴を開けます。ニッケルチタン合金線を慎重に穴に挿入してから、はさみで切断します。次に、ブランクインプラント群のマウスにニッケルチタン合金ワイヤーに沿って2マイクロリットルのYPD培地を一滴ずつ投与します。
ナイロン縫合糸を使用して、傷を層ごとに閉じます。次に、2マイクロリットルのカンジダ・アルビカンス細胞をPJI基のニッケルチタン合金ワイヤーに沿ってマウスの関節腔に接種する。ナイロン縫合糸を使用して、傷を層ごとに閉じます。
ネズミを飼育し、14日間水と餌を自由に食べられるようにします。
