バイオインク溶液を調製するには、適量のC3A細胞懸濁液を滅菌したゲルMA溶液と混合します。C3A細胞スフェロイドを2マイクロモルのセルトラッカー溶液で37度で20分間染色します。細胞を洗浄するには、まず遠心分離によってスーパーナチンを除去し、次に新しい細胞培養培地を加えます。
滅菌した音響装置チャンバーに少なくとも2ミリリットルのバイオインクを追加します。関数発生器とパワーアンプをオンにして、各PZTトランスデューサの作動を開始し、細胞凝集体の3Dアレイを生成します。青色光を使用してバイオインクを30秒間架橋し、3Dハイドロゲル足場を作成し、組み立てられた細胞凝集体を音響的にカプセル化します。
次に、3Dハイドロゲルスキャフォールドをチャンバーからペトリ皿に慎重に移します。きれいなカミソリで細かく切ってから、ペトリ皿に細胞培養培地を入れます。1マイクロリットルのカルシウムamと2マイクロリットルのヨウ化プロピジウムを含む1ミリリットルのPBS中で、C3A細胞スフェロイドを異なる培養時点で摂氏37度で15分間インキュベートします。
ハイドロゲル足場に埋め込まれたサンプルをPBSで2回すすぎます。回収したスフェロイドについては、200 Gで5分間遠心分離を行い、PBSで2回洗浄します。蛍光顕微鏡を使用して、回転楕円体を観察し、画像を取得します。
細胞凝集体を、緑色蛍光シグナルを有する規則的な3Dドットアレイパターンで配置した。組み立てられたC3A gelMA凝集体は徐々に統合され、スフェロイド直径の増加を伴って3日目までにタイトなスフェロイドを形成しました。細胞スフェロイドの生存率は3日目までは良好であったが、1週間の培養後にわずかに低下した。
放出されたスフェロイドは、アルブミンの望ましい生存率および発現とともに、狭いサイズ分布で良好な球形形態を維持しました。
