Diatom DNA Extraction from Water Sample and Human Lung Tissue Using a Modified DNA Extraction Kit

まず、遠心分離管で10ミリリットルの珪藻水サンプルを採取します。チューブを13, 400 Gで5分間遠心分離します。ピペットガンで、9.8ミリリットルの上清を慎重に廃棄します。

次に、200マイクロリットルの濃縮珪藻水サンプルを2ミリリットルの遠心チューブに移します。次に、溺死した人体から0.5グラムの肺縁組織を採取します。はさみで、肺組織が泥だらけになるまで切ります。

珪藻と肺の両方のサンプルからDNAを抽出するには、まず両方のサンプルにガラスビーズを添加します。サンプルをよく混合した後、40マイクロリットルのプロテイナーゼKをチューブに加えます。室温で15分間インキュベートした後、200マイクロリットルの結合バッファーを両方のチューブに加えます。

すぐにサンプルをボルテックスミキサーで4分間混合します。次に、チューブを摂氏70度のウォーターバスに10分間入れます。解決策が明らかになるまで。

次に、透明な溶液を凝集性沈殿物とともに移します。シリコンマトリックスを充填した長さ3センチメートルの吸着カラムに入れます。カラムを 8 , 000 G で 30 秒間遠心分離します。

次に、収集チューブ内の廃液を廃棄し、カラムを収集チューブに戻します。次に、500マイクロリットルの阻害剤除去バッファーをカラムに加え、13, 400 Gで30秒間遠心分離します。廃液を廃棄した後、700マイクロリットルの洗浄バッファーをカラムに加え、再度遠心分離します。

廃液を廃棄した後、吸着カラムを空の収集チューブに戻します。カラムを 14, 500 G で 2 分間遠心分離し、できるだけ多くの洗浄バッファーを除去します。次に、カラムを取り出し、清潔な遠心分離管に入れます。

吸着膜の中央部に100マイクロリットルの溶出バッファーを添加します。室温で5分間インキュベートした後、カラムを13, 400 Gで1分間遠心分離します。回収チューブで得られた溶液を吸着カラムに戻してから、再度遠心分離します。

溶出した珪藻DNAは、将来の使用のために摂氏2〜8度で保存してください。アガロースゲル電気泳動では、PCR増幅後、水サンプルと組織の両方で250〜500BPの珪藻DNAバンドが示されました。