まず、平らな長方形の磁石を選択して、ストリップパターン用の磁石セットを組み立てます。厚さ2ミリのシリコンプレートを2 x 8 x 30ミリメートルの長方形にカットします。次に、長方形の磁石とシリコンプレートを層ごとに組み立てます。
ドットアレイパターンの場合、各磁石セットが6 x 6グリッドに配置された36個の円筒形磁石で構成されていることを確認して、ミニチュア円筒形磁石を組み立てます。細胞培養装置を準備するには、厚さ2mmのシリコンプレートに1×1cmの長方形の穴を開けるためにパンチャーを使用します。穴の周りのシリコンプレートをトリミングして、穴を中央にした丸い型を作ります。
滅菌の場合は、金型を超音波洗浄機に入れます。金型を純水で10分間殺菌します。次に、水を75%エタノールと10分間交換します。
金型を滅菌箱に入れて摂氏65度で60分間乾燥させます。次に、滅菌したシリコン型を25mmの丸いガラスセルスライドに取り付け、シリコンがガラスに付着するように型を軽く押します。マグネットセットを6ウェルプレートに置き、マグネットセットの上に細胞培養デバイスを配置します。
30ミリモルのGd-DTPA注射液を調製するには、30マイクロリットルのGd-DTPAを470マイクロリットルの完全な細胞培養培地と混合します。細胞パターンを作製するには、HUVEC懸濁液を200Gで5分間遠心分離します。そして、ペレットをGd-DTPA含有培地に再懸濁する。
細胞カウント後、Gd-DTPA含有培地を用いて、細胞密度を10倍から約2倍から5細胞/ミリリットルに調整します。細胞懸濁液を静かに混合し、細胞培養型の空洞に200マイクロリットルを加えて、つばのある完全な液面を作成します。細胞が基質に付着するまでプレートを3〜6時間インキュベートします。
インキュベーション後、Gd-DTPA含有培地を完全培養培地と交換し、磁石セットから細胞培養装置を取り出します。縞模様の細胞パターニング用の細胞培養デバイスを調製するには、デバイスの厚いシリコンプレートを薄いプレートに交換します。前述したように、最初のタイプの細胞をパターニングした後、細胞培養装置を下の磁石から右に1ミリメートル移動させます。
同じパターニング手順を2番目のタイプの細胞に適用します。そして、3台目の細胞培養装置を下の磁石から右に1ミリ移動させます。示したように、3番目のタイプのセルをパターン化します。
すべてのタイプの細胞をパターニングした後、200マイクロリットルのPBSでスライドガラスを2回洗浄します。最後に、PBSを完全な細胞培養培地と交換します。Gd-DTPAで12時間処理したHUVECの生存率試験では、50ミリモルのGd-DTPAを除いて細胞生存率の有意な低下は見られず、統計的な差は生じたが、約90%の生存率を維持したマルチタイプセルパターニングでは、横並びのストライプと同心ドットアレイの三者セルパターンを生成した。
