組織の解離を開始するには、未治療の患者から1〜2立方センチメートルの肝細胞癌またはHTC組織を採取します。次に、組織を組織保存液に入れ、処理するまで摂氏4度に維持します。次に、超低接着表面細胞培養プレートを摂氏37度に設定したインキュベーターで1時間予熱します。
基底膜抽出物を摂氏4度で一晩解凍します。外科用ハサミを使用して、層流フード内のペトリ皿で腫瘍組織を細かく切ります。これらの小片を15ミリリットルの円錐形チューブに移し、5〜10ミリリットルの基礎培地を加えます。
バロトロピックピペットで、できるだけ多くの血液を洗い流します。混合物を1〜2分間落ち着かせてから、血球や浮遊脂肪塊などの上清の一部を取り除きます。次に、混合物を室温で300gで5分間遠心分離します。
次に、上清を慎重に抽出し、トリミングした組織に5ミリリットルの予熱した消化液を加えます。チューブをローターに摂氏37度で置き、最適な消化を行います。最初の消化から30分後、顕微鏡を使用して小さな細胞クラスターを探します。
消化を止めるには、チューブに5ミリリットルの冷たい基礎培地を加えます。次に、100マイクロメートルのセルフィルターを使用して、新しい50ミリリットルのチューブにふるいにかけます。チューブに冷たい基礎培地を充填して、総容量が50ミリリットルに達するようにします。
次に、細胞を2Gで8°Cで10分間遠心分離します。完了したら、上澄み液を慎重に取り除きます。ペレットを50ミリリットルの冷たい基礎培地に再懸濁して、オルガノイドプレーティング用の細胞ペレットを得ます。