患者由来の胃オルガノイドの包装準備が整ったら、オルガノイドのルーチンパスを開始します。まず、オルガノイドを含む培地を各ウェルから取り出し、基底膜マトリックスに埋め込み、24ウェルプレートで行います。次に、1ミリリットルの氷冷した高度なDMEM F12培地を、地下のメンブレンマトリックスドームに直接分注します。
ドームのすべての破片がプレートから剥がれるまで、培地の吸引と分注を続けます。次に、培地と断片化された基底膜マトリックスの両方をウェルから次のウェルに輸送し、包装が予定されているすべてのウェルに対してこのプロセスを繰り返します。最後の基底膜マトリックスドームを分解した後、培地と混合物を1.5ミリリットルのチューブに分注します。
1000マイクロリットルのチップをP1000ピペットに取り付け、このチップを200マイクロリットルのチップに挿入します。このピペットセットアップを使用して、オルガノイドマトリックス混合物を上下に約25回激しくピペット操作し、オルガノイドを細かく断片化します。断片化したオルガノイド混合物を、卓上遠心分離機を使用して、摂氏4度で30秒間、2000Gで遠心分離し、ピペットを使用して培地と基底膜マトリックス上清を吸引します。
計算された量の新鮮な基底膜マトリックスを、チューブ内のペレット状オルガノイドに加えます。チューブの内容物を静かに上下にピペットで動かして混ぜます。50マイクロリットルのオルガノイドマトリックス混合物を24ウェルプレートの個々のウェルに迅速に分注します。
すぐにプレートを覆い、1回の滑らかな動きでプレートを逆さまにします。反転したプレートを摂氏37度の組織培養インキュベーターに35分間入れて、基底膜マトリックスを重合させます。最後に、500マイクロリットルの予熱した胃オルガノイド培地を各ウェルに加えます。
開始後20日目までに、オルガノイドは継代の準備が整い、オルガノイドのサイズが大きいか、内部が暗くなったことが示されました。これらの点を超えるために残されたオルガノイドは、2D単層に分解し始めました。胃をパッケージングして再播種した後、ドームには多くのオルガノイド断片が含まれ、それらは非常に迅速にさらに多くのオルガノイドに再編成されました。
