まず、滅菌フードで、オートクレーブ24ウェルポットをエタノール滅菌細胞モジュールにねじ込みます。各ポットに900マイクロリットルのベースメディアを追加します。次に、オートクレーブ浸漬電極をセルモジュールの蓋に磁気的に接続します。
次に、ウェルの蓋を閉めて、浸漬電極が下部の電極ポットに収まるようにします。次に、細胞モジュールをインキュベーター内のアダプターに取り付けます。次に、ソフトウェアを起動し、レイアウトタブをクリックして、実験プレートマップをロードして注釈を付けます。
滅菌済みの24ウェル培養プレートを使用して、メンブレンインサートを保持します。コーティングが必要な場合は、ウェルの交点に細胞外マトリックス溶液を追加します シングルチャネルピペットを使用して、脳内皮細胞を各ウェルインサートの頂端チャンバーに慎重に播種します。無細胞ウェルを作成するには、インサートの1つに培地のみをピペットで挿入します。
次に、細胞モジュールをインキュベーターから滅菌フードに移します。ピンセットを使用して、準備したインサートを電極ポットに慎重に移します。セルモジュールをアダプターの上のインキュベーターに戻します。
次に、実験制御タブでスペクトルセクションを見つけ、[1ヘルツで開始]を選択し、100キロヘルツで停止して、全周波数範囲にわたるデータを取得します。次に、待機時間で 15 分を選択して、最速で連続測定を許可します。[start] を押して、データ収集を開始します。
約48時間後、内皮抵抗のプラトーに達したら、準備した治療薬をインキュベーターに入れて最適な温度を維持します。.15分間の測定直後に開始する選択した処理時間に細胞モジュールを取り外してください。滅菌フードで、セルモジュールを開きます。
次に、70マイクロリットルの治療をそれぞれのインサートの頂端チャンバーに慎重にピペットで移します。次の測定が始まる前に、すぐにセルモジュールをアダプターに戻してください。実験を終了するには、停止ボタンを押してから[ファイル]をクリックし、[エクスポート]をクリックしてデータを直接XLSファイルにエクスポートし、適切な名前を付けます。
レプリケートウェル間で多少のばらつきが観察されましたが、データの正規化によりこのばらつきが減少し、処理とコントロールとの比較が容易になりました。サイトカインを添加すると、経内皮電気抵抗の一時的な減少が観察されました。黒色腫細胞株は、5時間以内に耐性の大幅な減少を引き起こしました。
