LC-TIMS-TOF MS/MS による安定同位体標識脂質スクリーニング用質量分析計のキャリブレーション(英語)

質量分析計、またはLC-TIMS-TOF-MS/MSのMSキャリブレーションを開始するには、TIMS制御ソフトウェアを開き、キャリブレーションサブタブでm/zをクリックし、Dropboxからチューニングミックスを選択し、右下隅のキャリブレーションをクリックします。スコアが 100% に達するまで、[キャリブレーション] をクリックし続けます。次に、[モビリティ]タブを選択し、100%キャリブレーションスコアに達するまで、示されているのと同じ手順に従います。

検量線の各キャリブレーションポイントを生成するには、脂質内部標準混合物に10マイクロリットルの重水素化内部標準混合物をスパイクします。このようなスパイクサンプルを7つ調製し、目的の範囲の7つのキャリブレーションポイントに使用します。データ解析ソフトウェアを使用して、パッシブMS/MSパターンに基づいて脂肪酸鎖に手動でアノテーションを付けます。

安定同位体標識、またはSIL効率を決定するには、非SIL含有同位体の面積に対するSIL含有同位体の面積の比率を計算します。任意のサイトで標識された原子を見つける確率を決定することにより、理論パターンを計算します。実験用同位体プロファイルをデータ解析ソフトウェアでシミュレーションされた理論パターンに適合させることにより、SIL濃縮を計算します。

実行を開始するには、温度計ボタンをクリックしてカラムオーブンをアクティブにし、バルブボタンをクリックしてポンプをアクティブにします。MS メソッドを、以前に保存した適切なメソッドに設定します。注入量が5マイクロリットルであることを確認し、1つのターゲットのバイアルを20対1に並べて、サンプルリストを保存します。

シーケンスを開始し、システムに表示されるinjectedというメッセージでインジェクションが成功したことを確認します。1行目をコピーし、下に貼り付けて新しい2行目を生成します。実験に応じて、2行目にサンプルを入力します。

オートサンプラーの正しい位置が使用されていることを確認します。移動相が新鮮な場合は、まずメーカーが提供する脂質混合物標準試料を用いてピーク形状試験を行い、以前の結果と比較します。脂質混合物と標準物質が画面に表示されます。

新しいラインに正しい分離方法があり、ライン1で使用された前処理方法ではないことを確認してください。入力したMSメソッドが正しいことを確認してください。正しい処理方法がロードされていること、および自動実行プロセスが有効になっていることを確認します。

サンプルリストを保存して、現在の実行の終了後にサンプルが分析されるようにします。