脱細胞化肺細胞外マトリックスハイドロゲル形成のためのウシ肺組織の採取、脱細胞化、およびペプシン消化

1 まず、凍結したウシ肺組織2 を摂氏80度から取り出し、室温で解凍します。4 滅菌メスとハサミを使用して組織を解剖します 5 気管と軟骨気道を取り除き、6 組織を細かく刻みます。7 組織を 2% ペニシリンとストレプトマイシンを含む超純水 9 で 3 回洗います 8 。

10 ひき肉組織サンプル11を2%ヨウ素溶液に1分間浸漬し、次いで、滅菌蒸留水で2回連続して洗浄13を行う。14ティッシュピースを50ミリリットルのチューブ15に15ミリリットルのマークまで移します。16チューブの上部に蒸留水17を入れ、液体窒素で2分間凍結します。

18次に、すぐにチューブを摂氏19度の水を含むビーカー19に10分間移します。20 5回の凍結融解サイクルの後、21 試料を30ミリリットルのDNase溶液22に1時間インキュベートし、摂氏37度で23を絶えず攪拌しながらインキュベートする。24 湿った脱細胞化細胞外マトリックスサンプル25を摂氏80度で24時間凍結する。

26凍結したサンプルを凍結乾燥機27に移し、完全に乾燥するまで真空下28で3〜4日間乾燥モードで操作します。29凍結乾燥に続いて、30ドライアイスを含む粉砕装置でサンプルを微粉末31に粉砕する。32 肺組織を1%Triton-X-100 33で3日間、摂氏4度で穏やかに回転させ、35 24時間ごとに溶液を交換します。

36 サンプルをDNase溶液37で37°Cで1時間インキュベートし、絶えず攪拌します。38 ティッシュを蒸留水 39 絶えず転がしながら 3 日間洗浄し、40 24 時間ごとに水を補充します。41最後の洗浄後、前に示したように凍結乾燥およびクライオミリング42を行う。

43 1ミリグラム/ミリリットル 44 粉末脱細胞化細胞外マトリックス サンプル45 1ミリグラム/ミリリットルのペプシン溶液46を室温で48時間一定攪拌しながら消化します。47 効果的な消化のために、溶液のpHを2に保ちます。48 組織消化物を5, 000 gで10分間遠心分離し、49上清を取り除きます。