心血管研究のためのマウス大動脈および腸間膜動脈の分離とCD34⁺ 幹細胞の分離のための培養

まず、麻酔をかけたマウスを手術台に置きます。滅菌眼科用ハサミと鉗子を使用して、胸腔と腹腔を開きます。これにより、心臓と腸が露出します。

腸間膜動脈と大動脈を別々に慎重に解剖します。腸間膜動脈をPBSですすぎ、1%ペニシリン-ストレプトマイシン-アンホテリシンB溶液を含む10センチメートルのシャーレに移します。.同様に、大動脈をすすぎ、同じ溶液を含む別のペトリ皿に移します。

大動脈と腸間膜動脈の周りのすべての脂肪をすばやく取り除きます。2回すすいだ後、動脈を組織培養フード内の実体顕微鏡下に置きます。動脈に沿って慎重に縦方向に切り込みを入れます。

次に、細い鉗子を使用して、大動脈の外層と腸間膜動脈の最初の枝をはがします。0.1〜0.2ミリリットルの培地が入った3.5cmのシャーレに外層を置き、約1立方ミリメートルの小片に切ります。ティッシュ片をゼラチンでコーティングされたT-25フラスコに移します。

フラスコを摂氏37度のインキュベーターに垂直に置き、二酸化炭素を5%にします。3時間後、5ミリリットルのDMEM高グルコース増殖培地をフラスコに追加して、すべての組織ブロックを沈めます。