心血管研究のための磁気的に単離されたCD34⁺ 幹細胞の特性評価

マウス大動脈および腸間膜動脈から単離されたCD34+幹細胞を特徴付けるには、組織ブロック培養を行い、磁気分離によって細胞を取得します。分化後の線維芽細胞マーカー発現における内皮細胞を検出するには、488ナノメートルのレーザー励起を用いて40倍の倍率で細胞を観察します。細胞をトリプシンした後、遠心分離によりペレット化し、100マイクロリットルの選別緩衝液に再懸濁します。

その後、抗マウスCD16/CD32モノクローナル抗体と4°Cで5分間インキュベートします。次に、免疫蛍光染色のために各所望のモノクローナル抗体をそれぞれ2マイクロリットル加え、再度摂氏4度で10分間インキュベートします。細胞を1ミリリットルの緩衝液で2回洗浄します。

示されているように細胞を遠心分離した後、上清を除去し、細胞を300マイクロリットルのバッファーに再懸濁します。細胞をフローチューブに移し、アイスボックスに入れます。フローサイトメトリーを実行して、分化した細胞の割合を確認します。

フローサイトメトリー評価により、単離されたCD34+血管壁幹細胞の高純度が確認されました。細胞免疫蛍光染色により、単離されたCD34+幹細胞は、主に幹細胞マーカー、CD34、c-kit、およびFlk-1を発現していることが示されました。フローサイトメトリーでは、単離されたCD34+幹細胞がin vitroで内皮細胞および線維芽細胞に分化する能力を有することも確認されました。