ゼブラフィッシュの幼生の調製、マウント、および心臓発生研究のためのライトシートイメージング

まず、実体顕微鏡をオンにして、施肥後0日から7日の間のゼブラフィッシュの幼生の成長を記録します。0.8%低融点アガロースを1リットルあたり150ミリグラムのトリカインで調製します。アガロースを室温まで冷却したら、トランスファーピペットを使用して、麻酔をかけたゼブラフィッシュをアガロースに移します。

別のトランスファーピペットを使用して、アガロースを含む魚をフッ素化エチレンプロピレンチューブに取り付けます。ゼブラフィッシュの仔魚を装着したチューブを、6軸電動ライトシート顕微鏡サンプルステージに取り付けます。E3水で満たされたサンプルチャンバーにチューブを沈めます。

ゼブラフィッシュの幼生を腹側から回転させると、心臓がよく見えるようになります。電動サンプルステージをワークステーションに接続します。そして、希望の移動モードを含む、必要なすべてのパラメータを構成します。

CMOSカメラとワークステーション間の接続を確立します。ステップ サイズを 1 マイクロメートルに、フレームの総数を 300 に、露光時間を 5 ミリ秒に設定します。次に、目的の関心領域を定義します。

レーザーの電源を入れ、幼虫のライトシート顕微鏡イメージングを開始します。幼虫の3〜5回の心周期をカバーするために、300フレームを2D画像シーケンスとして記録します。心臓全体が覆われるまで、新しいサンプルスライスの別の画像シーケンスを記録します。