まず、加熱された活性化FBS、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むDMEM中のHEK-293T ACE2 TMPRSS2細胞をT75フラスコに維持します。細胞カウントでは、20マイクロリットルの細胞懸濁液と20マイクロリットルのトリパンブルー溶液を混合します。20マイクロリットルの色素混合細胞懸濁液を細胞計数チャンバーに加え、1ミリリットルあたりの細胞数をカウントします。
4つのHEK-293T ACE2 TMPRSS2細胞の10乗の2.5倍を、50マイクロリットルの完全DMEM培地に96ウェルプレートの各ウェルに播種します。二酸化炭素インキュベーターで細胞を摂氏37度で一晩インキュベートします。翌日、50マイクロリットルのDMEMを50マイクロリットルのウイルス懸濁液に交換し、摂氏37度で18時間インキュベートします。
インキュベーション後、7.5マイクロリットルの細胞溶解バッファーを各ウェルに添加し、オービタルシェーカーで2分間混合します。細胞が溶解したら、調製したばかりのホタルルシフェラーゼアッセイ溶液を加え、オービタルシェーカーで1分間混合します。市販のルシフェラーゼマイクロプレートリーダーを使用してルシフェラーゼ活性を分析します。
中和抗体アッセイでは、前述のようにHEK-293T細胞を50マイクロリットルの完全DMEMに播種します。96ウェルプレートに、8マイクロリットルの27 BV中和抗体を添加し、6マイクロリットルの無血清DMEMで段階希釈を行います。段階希釈した抗体に54マイクロリットルのHa-CoV-2ウイルス粒子を加え、懸濁液を混合します。
5%二酸化炭素中で摂氏37度で1時間インキュベートします。次に、HEK-293T細胞を含むウェルに50マイクロリットルのウイルス懸濁液を加えます。コントロールでは、HEK-293T細胞のみを含むウェルに50マイクロリットルの完全なDMEM培地を添加します。
プレートを摂氏37度のインキュベーターに18時間入れます。前述したように細胞を溶解した後、調製したばかりのホタルルシフェラーゼアッセイ溶液を添加し、1分間の眼窩振とうにより混合します。市販のルシフェラーゼマイクロプレートリーダーを使用してルシフェラーゼ活性を分析します。
Ha-CoV-2オミクロン株とオミクロン株は、野生型のHa-CoV-2よりも4倍から10倍高いシグナルを発し、感染力が高いことを示唆しています。抗体27 BVは、デルタ株とオミクロン株の両方に対して中和活性を示しました。オミクロン株のID50は27BVで、野生型とデルタ株のID50の約10倍の効力が低かった。
