ハードパーム種子のMALDI-IMS分析のための種子セクショニングプロトコルとマトリックス堆積技術

まず、3つのeuterpe precatoria種子と3つのEuterpe edulis種子を脱イオン水に24時間浸します。24時間後、クライオスタットをオンにし、温度を摂氏20度にします。湿った種を水から取り出し、ミクロトームの刃を使って半分に切ります。

新鮮で温かい10%ゼラチン溶液を調製します。種の半分を型に置き、ゼラチン溶液を入れます。20°Cで2時間凍結させてから、クライオスタットにかけます。

最適な切削温度コンパウンド(OCT)を使用して、埋め込まれたシードをクライオスタット支持体に付着させ、OCT硬化のためにクライオスタット内で10分間放置します。次に、酸化インジウムスズでコーティングされたスライドガラスまたはITOスライドに銅両面粘着テープを貼り付けます。各種から20マイクロメートルの厚さの切片を作成し、ITOスライドガラスに貼り付けた粘着テープの上に貼り付けます。

マトリックス堆積の場合は、スライスを含むスライドを真空デシケーターに入れ、室温に達するまで置きます。各スライドの隅に修正ペンを使用してティーチングマークを作成し、テーブルスキャナーを使用してスライドをスキャンします。分析天びんを使用して、30ミリグラムのDHBを秤量します。

次に、等量のメタノールと0.1%トリクロロ酢酸を含む1ミリリットルの溶液を調製し、調製した溶液に秤量したDHBを溶解する。1ミリリットルのガラスシリンジにDHB溶液を充填し、毎時0.8ミリリットルの流量でシリンジポンプに置きます。ピックチューブを使用して、シリンジを大気圧化学イオン化またはAPCIニードルに接続し、窒素をニードルに接続します。

流量を12.5PSIに設定します。APCIニードルをXYモーションプラットフォームに取り付けます。APCI針の先端がスライドから4センチメートル上にあることを確認します。

描画ソフトウェアを使用して、XYモーションプラットフォームをテンプレートに従うように設定し、プラットフォームがテンプレートを20回繰り返すのを待ちます。