腫瘍スフェロイド作製のための角錐型マイクロウェルの作製

まず、2グラムまたは約1ミリリットルの負のPDMS前駆体溶液を、6ウェル四方のパラメタルマスターモールドの1つのウェルに注ぐ。マスターモールドをPDMSで覆った後、プレートを真空乾燥液に入れて溶液を脱気します。次に、プレートを摂氏60度のオーブンに24時間入れてPDMSを硬化させます。

PDMSが硬化してもまだ温かい状態になったら、スパチュラを使用してマスター金型からPDMS金型を慎重に取り外します。次に、生検パンチで、直径35ミリメートルのスラブに切断します。適切にカットしたPDMS型をシャーレに入れ、蓋をして室温でさらに24時間硬化させます。

ポジ型PDMS型を準備するには、ネガ型PDMSモールドの35ミリメートルのスラブを35ミリメートルのシャーレに入れ、テクスチャード加工されたマイクロウェルを上に向けて置きます。2.5グラムまたは約1.2ミリリットルのポジティブPDMS前駆体溶液をペトリ皿のネガティブモールドに注ぎます。前駆体溶液を30分間脱気してから、摂氏60度のオーブンに3〜4時間入れます。

硬化後、ペトリ皿から型を取り除きます。すぐにネガ型からポジ型をはがします。10ミリメートルの生検パンチを使用して、ポジティブモールドをスラブに切断します。

次に、ピンセットを使用して、各10ミリメートルのポジ型モールドの平らな面を、事前に準備したPDMS接着剤前駆体溶液にそっと浸します。48ウェルプレートのウェルにウェルごとに1つの金型を慎重に配置します。各型をそっと押して、井戸の底に接着します。

組み立てたプレートを摂氏60度で4〜24時間インキュベートして、接着剤を硬化させます。