ライブイメージング研究のためのマウスにおける卵母細胞の採取、調製、およびマイクロインジェクション

まず、実験に必要なすべての材料を作業台に配置します。マウスから卵巣を抽出した後、1マイクロモルのミリノンを添加した予熱したM2とウシ血清アルブミン培地に入れます。手術針で卵巣卵胞に穿刺し、胞状卵胞から成長する卵母細胞を放出します。

マイクロピペットを使用して、実験に必要なサイズの卵母細胞を採取します。次に、卵母細胞を新鮮な培地の入った皿に移します。マイクロピペットを使用して卵母細胞を滴から滴へと移します。

これにより、胞状濾胞細胞からの卵母細胞の機械的解離が可能になります。卵母細胞を摂氏37度で1時間安定させます。cRNAアリコートを遠心分離し、YFP-RangoおよびSRSF2 GFPをコーティングします。

マイクロインジェクターを使用して、ミルリノンを添加した温かいM2とウシ血清アルブミン培地で卵母細胞の細胞質にcRNAを注入します。卵母細胞を摂氏37度の培地で2時間インキュベートし、cRNAを翻訳します。次に、卵母細胞を培地液滴に堆積させ、鉱物油で覆われたカバーガラス底チャンバーを備えた35ミリメートルの組織培養皿に置きます。