まず、30マイクロリットルのConcanavalin-Aビーズを1.5ミリリットルの遠心分離チューブに加えます。ビーズに結合緩衝液のピペット300マイクロリットル。チューブを複数回反転させてよく混ぜてから、チューブを磁気ラックに置きます。
溶液が明確になったら、上清をピペットで排出します。チューブをラックから取り外した後、チューブに300マイクロリットルの結合バッファーをピペットで取り付けます。もう一度反転して、チューブの内容物を混合します。
チューブの内容物を8 PCRチューブストリップの3本のチューブに均等に分配し、溶液が清澄になるまでチューブストリップを磁気ラックに置きます。上清を取り除いた後、10マイクロリットルの結合緩衝液をチューブにピペットで入れて混合します。準備したビーズを氷の上に置いて、さらに実験します。
次に、培養マウス筋芽細胞をプレートからトリプシン化します。細胞を遠心分離した後、真空を使用して真空で上清を除去します。次に、ペレットをPBSに再懸濁します。
懸濁液の細胞数を計数した後、細胞を遠心分離し、次いでペレットを適切な量の洗浄緩衝液に再懸濁して、ミリリットルあたり700,000細胞の細胞密度を生成する。この細胞懸濁液100マイクロリットルをPCRチューブストリップの各チューブにピペットで注入し、よく混合した後、チューブストリップをシーソーモーションシェーカーに室温で10分間置き、Concanavalin-Aビーズが細胞を捕捉するようにします。上清をピペッティングする前に、磁気ラックでチューブの内容物をもう一度明確にします。
最後に、上清を顕微鏡で観察し、Concanavalin-Aビーズが細胞に結合する有効性を評価します。
