線虫培養のためのOP50の調製

まず、5ミリリットルのLBにOP50コロニー1個にアンピシリンとアムホテリシンBを接種し、バクテリアシェーカーで摂氏37度で約6時間インキュベートします。培養物が曇ったら、OP50の前回培養物をアンピシリンとグリセロールでTBの250ミリリットルで1〜2, 000で希釈します。次に、OP50液体培養物を滅菌遠心分離チューブに移します。

4°Cの卓上遠心分離機でチューブを3,100Gで15分間遠心分離します。上清を捨て、再遠心分離する前にOP50ペレットを滅菌水に再懸濁します。2回目の洗浄後、上清を捨て、OP50ペレットを滅菌水に再懸濁して50ミリリットルの容量にします。

事前に計量した50ミリリットルの円錐管に移します。チューブを20分間遠心分離して、OP50をペレット化します。遠心分離の最後に、チューブ内に水が残らないように、残っているすべての上清を慎重に取り除きます。

ペレットの入った遠心分離管の重量から空の遠心分離管の重量を差し引いて、ペレットの重量を計算します。OP50ペレットをS-completeバッファーに完全に再懸濁して、100ミリグラム/ミリリットルの濃度を達成します。OP50懸濁液を寒天プレートでテストして、汚染がないか確認します。

OP50懸濁液は、摂氏4度のS-completeバッファーに保管します。