まず、カットされた200マイクロリットルのピペットチップの底を、既製のマイクロ流体トラップデバイスに挿入します。ピペットは、0.2マイクロメートルのフィルターを装備したシリンジを使用して、チップの入口リザーバーに400マイクロリットルのベータカゼイン溶液を注入します。チップを900Gで6分間遠心分離します。
これで、液体レベルは入口と出口の両方で等しくなるはずです。2枚の対物レンズスライドにスペーサーの輪郭を描きます。スライドを高酸素プラズマで1分間洗浄し、親水性にします。
スライドの上に低ゲル化温度のアガロースを、アガロースで完全に覆われるまで加えます。次に、スライドを90度の角度で傾け、余分なアガロースを組織に排出します。スライドを摂氏50度に30分間置きます。
1ミリメートルのプローブを装備したハンドヘルドプローブソニケーターを使用して、調製したプロテオリポソームを超音波処理します。プロテオSUVを30秒間氷の上に置いてから、超音波処理を5回繰り返します。100マイクロリットルのシリンジを使用して、調製したアガロースゲルにプロテオSUVの0.5マイクロリットルの液滴を沈着させます。
窒素の流れを約10分間使用して、液滴を乾燥させます。注射器と針で、膨潤溶液を側面の小さな穴から準備されたチャンバーにピペットで入れ、小胞を摂氏22度で少なくとも30分間膨潤させます。チャンバーを固体表面に軽くたたいて、ゲルからGUVを採取します。
顕微鏡検査用のGUVをトラップするには、不動態化処理されたマイクロ流体チップを顕微鏡に取り付けます。欠陥がないか確認した後、曲げた針でチューブをリザーバー出口に接続します。もう一方の端を1ミリリットルのシリンジに接続した後、シリンジを最大流量10マイクロリットル/分のポンプに取り付けます。
リザーバーの洗浄バッファーを新しい媒体と交換します。少なくとも80マイクロリットルの緩衝液Pで洗浄し、余分な緩衝液を取り除いた後、プロテオGUVをリザーバーに加えます。十分な数のGUVがチップに閉じ込められるまで、チップを経時的に監視します。
余分なGUV溶液をピペットで取り出します。次に、洗浄バッファーPを1分あたり0.1〜1マイクロリットルの流速で追加します。最後に、トラップを十分な量の小胞で位置を特定します。
設定を顕微鏡に適用した後、バッファーRを毎分0.5マイクロリットルの流量でリザーバーに加えます。低ゲル化温度のアガロースゲル上で乾燥したプロテオLUVを再水和すると、マイクロメートルサイズの小胞が形成されました。GUVを採取し、ベータカゼイン不動態化マイクロ流体デバイスに閉じ込めました。
