タンパク質パターンを生成するためのdisiLID官能化ジャイアントユニラメラ小胞(GUV)へのmOrange-Nanoリクルートメント

まず、収穫したばかりのGUVのチューブを取ります。ストレプトアビジン溶液を加え、室温で30分間放置します。次に、1マイクロモルのb-disiLIDをGUV溶液に加えます。

サンプルをアルミホイルで覆い、暗所に保管します。マイクロスライドの18ウェルガラスボトムチャンバーを150マイクロリットルのBSA溶液で10分間前処理します。次に、BSA溶液を取り出し、ウェルを150マイクロリットルの水で3回洗浄します。

次に、145マイクロリットルの200ナノモルmOrange-nanoをバッファーでウェルに加えます。溶液にb-disiLIDで装飾された5マイクロリットルのGUVを追加します。サンプルをアルミホイルで覆い、小胞が沈殿するまで約15分待ちます。

その後、マイクロスライドを共焦点顕微鏡の下に置きます。サンプルを552ナノメートルで励起し、mOrange可視化します。また、GUVの膜内のDIDは638ナノメートルです。

mOrange-nano GUVは、暗闇では蛍光を示せませんでした。GUVメンブレンで定量化されたmOrange強度は、完全可逆性を備えた迅速かつ効果的なタンパク質リクルートを示しました。