フローサイトメトリー解析を開始するには、まず785ナノメートルレーザーを暗視野測定用に5ミリワットの出力に設定します。60倍レンズを使用し、開口数が0.9です。次に、高感度設定を選択し、速度を低速に設定します。
キャリブレーションビーズの安定性を確保するには、流路系ボックスの再生ボタンを押して、ビーズの画像を調べると、シャープでクリアに見えるはずです。ワークスペース ボックスで新しい散布図を生成するには、[新しい散布図] を選択します。次に、SSCチャンネルの強度に対応する明視野チャンネルの領域を選択し、サンプル内で同時に実行されているキャリブレーションビーズを除外します。
次に、ロードボタンを押して、乳酸桿菌サンプルの入ったチューブをホルダーにセットします。[Acquisition Settings] ボックスにサンプル名を入力し、データ ストレージの場所を指定します。収集するイベントの数を設定します。通常は 10, 000 から 20, 000 のイベントの範囲内です。
次に、取得ボックスにある[記録]ボタンをクリックして、取得プロセスを開始します。プロセスは、指定されたイベント量に達すると停止します。リターンボタンを押してチューブをアンロードし、ポップアップウィンドウの指示に従ってホルダーから取り外します。
すべてのサンプルに対してこのプロセスを繰り返した後、データ取得の均一性を維持するためにテンプレートを保存します。データ分析の場合、RAWファイルを分析ソフトウェアにロードするには、[ファイル]をクリックしてrifファイルを開きます。開いたウィンドウで、[Use Acquisition Analysis] を選択し、[OK] をクリックします。次に、勾配平均平方根のヒストグラムを作成するには、[新規ヒストグラム] ボタンをクリックし、分析する母集団を取り込みから選択します。
[X 軸] 機能で、明視野チャネルの [グラデーション RMS] を選択します。次に、解析領域の [Create Line Region] ボタンをクリックして、フォーカスされていないイベントを除外するゲートを配置します。エリアとアスペクト比の散布図を作成するには、解析エリアの [New Scatterplot] ボタンをクリックします。
[新しい散布図]ウィンドウでフォーカスされた母集団を選択します。次に、X軸フィーチャーの明視野チャネルの領域を選択します。Y 軸機能のアスペクト比を選択します。
[Create Rectangle] ボタンを使用して、集計イベント母集団の面積値に基づいて散布図にゲートを描画します。同様に、singles と small aggregates の母集団に対して別のゲートを描画します。「ファイル」タブをクリックし、「テンプレートとして保存」を選択してデータ分析をテンプレートとして保存し、同じテンプレートの下の次のサンプル・ファイルを開いてデータ分析ファイルを作成します。
集計サイズの分布を測定するには、まず、集計イベント母集団の面積のヒストグラムをプロットします。ファイルをクリックし、[テンプレートとして保存]オプションを選択して、データ分析を保存します。保存後、データ分析ファイルと同じテンプレートで次のサンプルファイルを開きます。
LGGとL.paracaseiでは、単一細胞、小さな凝集体、大きな凝集体、および鎖が観察されましたが、鎖と大きな凝集体を区別することはできませんでした。異なるLAB株の凝集特性には、発酵性糖または非発酵性糖に応答して有意な変動が観察されました。
