細胞とナノ粒子の液滴へのカプセル化による蛍光イメージング

まず、1ミリリットルの注射器に500マイクロリットルの連続相を満たします。PTFEマイクロチューブを27ゲージの0.75インチ針に取り付けます。アセンブリをシリンジに取り付け、続いてシリンジポンプに取り付けます。

次に、0.75 mm の生検パンチを使用して、PDMS 切り欠きの中央に穴を開けます。切り欠きの穴から約3cmのPTFEチューブを引っ張り、アセンブリを200マイクロリットルのピペットチップの上部に押し込みます。ピペットの上部にUV硬化型接着剤でコネクタを密封し、チューブの反対側を23ゲージの1.25インチ針に取り付けます。

次に、2つの1ミリリットルの注射器に500マイクロリットルの軽質鉱物油を入れます。23ゲージの針2本をカスタムメイドのアタッチメントで取り付け、シリンジポンプに取り付けます。シリンジポンプ制御ソフトウェアを使用して、官能基化ナノ粒子と細胞溶液を水相のピペットチップに吸引します。

用意した観察室を清掃した後、ネオジム磁石を2個取り付けたプリントチャンバーホルダーに30°Cで固定します。次に、両方のポートを開き、上部ポートにペーパータオルを差し込んで、充填中に余分な外相を吸収します。連続相をマイクロ流体チップの上部インレットに接続します。

次に、毎時1800マイクロリットルの流量で約30秒間、連続相でチップをフラッシュします。水溶液のピペットチップをチップの中央の2つの入口に取り付けます。各溶液について、水溶液の流動を毎時200マイクロリットルで開始します。

液体が出口に現れたら、毎時800マイクロリットルでフッ素化油相の流れを開始します。出口に均質な灰色の光沢のある溶液で示される安定した液滴生成が確立されるまで待ちます。次に、PTFEマイクロチューブを出口ポートに接続して、液滴を収集します。

指で締めるワンピースフィッティングのフェルールモジュールを使用して、観察室に誘導します。チャンバーが満たされたら、流れを止め、指で締める圧力を使用してポートプラグでポートを閉じます。液滴が生成されたら、チップをフッ素化オイルで洗い流し、続いて窒素で洗い流し、残っている液体を吹き飛ばします。

チャンバーホルダーをウェルプレートフォーマットステージで顕微鏡に取り付けます。次に、10倍対物レンズを使用して、顕微鏡を明視野チャンネルに切り替えます。明視野内の固定化された液滴に焦点を合わせ、チャンバーの中央に移動します。

次に、自動フォーカスシステムをアクティブにします。液滴のエッジが油相や背景と簡単に区別できる鋭い黒い円として表示されるように、明視野チャネルの測定面を調整します。各蛍光チャネルを通過し、最適な測定面を設定します。

再配置測定では、FITC、TRITC、およびCyanine5チャネルのナノ粒子凝集体に注目します。