レンチウイルス生産のための非リポソーム脂質トランスフェクション試薬を用いたHEK293T細胞のトランスフェクション

まず、レンチウイルス成分を15ミリリットルのチューブに加え、ECバッファーで容量を600マイクロリットルにします。36マイクロリットルのエンハンサー溶液を追加し、1ミリリットルのピペットを使用して繰り返し混合し、液体の一部を引き出して溶液に戻します。5分後、120マイクロリットルのトランスフェクション試薬を加え、前に示したように約20回混合します。

チューブを室温で10分間放置します。次に、5.2ミリリットルのcDMEMをチューブに追加します。使い捨てのトランスファーピペットを使用して、トランスフェクション混合物をT175フラスコで培養したHEK293T細胞単層に滴下します。

フラスコの穏やかな左右の揺動運動を通じてプラスミドを均等に分配します。培養物を摂氏37度、二酸化炭素5%で48時間インキュベートします。蛍光顕微鏡下でのインキュベーション後、GFP蛍光を観察することにより、HEK293T細胞の効果的なトランスフェクションを確認します。

次に、フラスコを傾け、25ミリリットルの血清学的ストリペットを使用して、細胞単層を乱さずに培地を収集します。メディウムを事前にラベル付けされた50ミリリットルチューブに移し、蓋を閉めます。単層を乱さずにフラスコの壁に沿って25ミリリットルの温かいcDMEMを追加し、フラスコをインキュベーターに戻します。

24時間後、培地を回収し、除染液をフラスコに加え、次の24時間水平に置きます。