ナノ秒パルス電場(nsPEF)刺激RSC96細胞における神経栄養因子および転写因子の発現の検出

まず、電気刺激を受けたRSC96細胞を培養皿に取り込んでください。次に、組織学ペンを使用して、カバースリップ上の細胞が均等に分布している場所に円を描きます。50〜100マイクロリットルの透過処理作業溶液を細胞に加え、室温で20分間インキュベートします。

次に、細胞をPBSで3回、それぞれ5分間洗浄します。次に、円内に3%BSAを添加して組織を均一に覆い、室温で30分間インキュベートします。その後、ブロッキング溶液を静かに除去し、適切に希釈した一次抗体を細胞に加えます。

細胞培養プレートを湿った箱に入れ、摂氏4度で一晩インキュベートします。次に、PBSで細胞を3回、連続的に振とうしながら5分間ずつ洗浄します。対応する二次抗体を添加し、室温で50分間インキュベートします。

インキュベーションの終わりに、カバースリップをPBSに入れ、それぞれ5分間振とうしながら3回洗います。次に、スライドを乾燥させ、乾燥させたスライドにDAPI染色溶液を加えます。最後に、乾燥させたカバースリップを、蛍光を発する退色防止封入剤で密封します。

Alexa Fluor 488、SCI3、SCI5の特定の励起波長と発光波長を使用して画像を取得します。顕微鏡分析では、散在する細胞質S-100ベータ陽性細胞がすべてのグループで赤で示され、S-100ベータ蛍光の統合光学密度の増加が、対照群および10キロボルト/センチメートル群と比較して5キロボルト/センチメートルのグループで観察されました。細胞質が散在するGFAPおよびSox10陽性細胞は、細胞クローリングアッセイ中にすべてのグループで観察されました。

しかし、GFAP発現は、対照群および10キロボルト/センチメートル群と比較して、5キロボルト/センチメートル群で有意に低かった。5キロボルト/センチメートル群のRSC96細胞は、Sox10発現の平均グレー値が有意に高く、Sox10発現の増強が示唆されました。