マウス精巣上体脂肪組織の抽出と幹細胞の単離によるフローサイトメトリーおよび機能特性評価

まず、安楽死させたマウスを腹側を上にしてコルクボードに置きます。ピンセットを使用して、腹部の中央にある剃った皮膚を持ち上げ、滅菌ハサミで切開します。皮膚を切り開いて腹膜から剥がします。

次に、腹膜層を持ち上げてカットします。新しい滅菌ピンセットとハサミのセットを使用して、精巣の上にある精巣上体脂肪組織全体を優しくつかみ、持ち上げ、切断します。切除した脂肪を、氷上の基礎培地を含む50ミリリットルの滅菌円錐管に入れます。.

次に、精巣上体組織をPBSで洗浄します。滅菌ピンセットを使用して、精巣上体脂肪組織を15〜20ミリリットルの消化液を含むチューブに移します。滅菌ハサミで組織を断片に切ります。

次に、組織片を摂氏37度で1時間インキュベートします。サンプルを等量の基礎培地で希釈して、コラゲナーゼを不活性化します。懸濁液を250Gで摂氏4度で10分間遠心分離します。

上清を捨てた後、ペレットを1ミリリットルの基礎培地に再懸濁します。次に、単離された細胞を含む3ミリリットルの基礎培地を含む6ウェルプレートのウェルをご覧ください。細胞を摂氏37度で一晩、5%二酸化炭素とインキュベートします。

翌日、PBSで洗浄した細胞に3ミリリットルの基礎培地を加えます。脂肪組織から抽出した細胞は、間葉系幹細胞の形態が一致したことを示しました。