まず、DPBSを使用して、1ミリリットルあたり2ミリグラムの酸化亜鉛ナノ粒子溶液を調製します。2倍の段階希釈を行い、異なる濃度にします。試験した各酸化亜鉛ナノ粒子濃度の100マイクロリットルを96ウェルプレートに加えます。
細菌培養物をトリプシン大豆ブロスまたはTSB培地で1ミリリットルあたり100万CFUに希釈します。異なる濃度の酸化亜鉛ナノ粒子溶液を含む各ウェルに100マイクロリットルを加えます。プレートを摂氏37度で24時間インキュベートします。
各ウェルから100マイクロリットルの酸化亜鉛ナノ粒子を細菌溶液でピペットで動かし、10からマイナス6になるまでさまざまな10倍の穀物希釈液を調製します。4つの希釈液から50マイクロリットルをトリプシン性大豆寒天培地TSA培地プレートに移します。寒天プレートを摂氏37度で24時間インキュベートします。
各グループで可算可能な希釈係数を選択した後、可算希釈プレート内のすべてのコロニーをマークし、濃度がミリリットルあたりのCFU数になるように再計算します。取得したデータを使用して、ネガティブコントロールの細菌に対する生きた細菌の割合を表します。酸化亜鉛ナノ粒子の抗菌特性は、1ミリリットルあたり50万CFUの緑膿菌株で試験されました。
ナノ粒子の抗菌活性は、濃度依存的に増加しました。しかし、原液でない細菌培養の開始時から細菌コロニーの数が目に見える減少を見せたことは明らかではありませんでした。1ミリリットルあたり50万CFUのMRSA株に対して試験したところ、これらのナノ粒子は抗菌活性の増加を示し、細菌のコロニー形成の大幅な減少につながりました。