ノテキシン損傷後のマウス骨格筋の解剖と単一細胞解析のための細胞解離法

マウスを安楽死させた後、両後肢からTA筋とGA筋を解剖し、ペトリ皿の蓋に入れます。はさみを使用して、組織をみじん切りのスラリーに切ります。ミンチ組織を5ミリリットルの氷冷解離緩衝液が入った50ミリリットルのチューブに移し、氷上に保ちます。

サンプルチューブを37°Cに加熱したら、インキュベーター内で回転させて45分間インキュベートします。10ミリリットルの洗浄剤をサンプルチューブに加え、ボルテックスします。チューブを遠心分離し、内容物を4ミリリットルに吸引します。

次に、コラゲナーゼとディスパーゼをそれぞれ0.5ミリリットルずつ細胞に加えます。次に、ボルテックスしてインキュベートします。インキュベーション後、分解したサンプルを遠心分離し、5ミリリットルのピペットでペレットを再懸濁します。

次に、50ミリリットルのチューブに置いた40マイクロメートルのセルストレーナーを5ミリリットルの洗浄培地で事前に濡らします。20ゲージの針が付いた5ミリリットルの注射器を使用して、細胞懸濁液を10回吸引して排出します。次に、あらかじめ濡らした40μmのセルストレーナーで細胞懸濁液を濾します。

残りの細胞を10ミリリットルの洗浄培地で回収して濾した後、細胞懸濁液を遠心分離してペレット化し、チューブから上清を吸引し、ペレットを穏やかにフリックして緩めます。