トランスジェネシスアプローチとしてのマウス胚心臓の抽出とエレクトロポレーション

まず、ピペットプーラーを使用して、幅20マイクロメートルのガラスキャピラリーを伸ばします。抽出したマウスの子宮を乾いたペーパータオルの上に置きます。次に、細いハサミの先を子宮の子宮筋層側に挿入し、刃先をゆっくりと全長に通してカットします。

さて、デシドゥイを露出させてカットします。それらを成長培地の入った皿に移します。決定を解剖して胚を抽出します。

胚を温かい成長培地が入った60ミリメートルのシャーレに移します。一対の細い鉗子で、胚の尾と頭を慎重に切り、体の胴体だけを残します。心臓や肺動脈、大動脈に損傷を与えることなく、体幹からできるだけ多くの組織を慎重に取り除きます。

新しい伸ばした針をマウスピペットの先端に挿入し、準備したプラスミドミックスの10マイクロリットルを慎重に吸引して、伸ばした針にロードします。温めたPBSが入った清潔な60mmのシャーレにハートを1つ入れます。皿を解剖顕微鏡の下に置きます。

正極と負極の極間距離を約4mmに調整します。次に、口のピペットに針を入れて、心臓の最も表面的な層に優しく穴を開けます。プラスミドミックスの1〜2マイクロリットルを心臓に移します。.

針を慎重に取り外します。心臓が両極の間にくるように電極を所定の位置に保持します。次に、心臓をエレクトロポレーションします。

エレクトロポレーションされた心臓を、1ミリリットルの成長培地を含む新しい12ウェルプレートに移します。分析まで、プレートを摂氏37度で5%二酸化炭素の下でインキュベートします。