クオラムセンシングの抑制を評価するためのチオフェネスルホンアミドによる 大腸菌 培養物の処理

まず、LysogenyブロスまたはLB培地を入手し、抗生物質を培地に加えます。5ミリリットルの培地をキャップ付きの滅菌試験管に分注します。フリーザーストックから採取したプラスミドを発現する大腸菌株を培地に接種し、培養物をシェーカーで一晩インキュベートします。

次に、DMSOとボルテックスで10ミリモルのチオフェンスルホンアミド溶液を調製して十分に混合します。15ミリリットルの円錐管で採取した培地10ミリリットルで培養物を1〜100倍に逆希釈します。渦を少し混ぜます。

96ウェルプレートの適切なウェルに培養物を加えます。混合後、行AからEまでの希釈シリーズを調製し、毎回50マイクロリットルの溶液を移します。プレートを微多孔質テープで覆い、インキュベートします。

テープをはがした後、プレートリーダーを使用して、600ナノメートルのGFPとmCherryで光学密度を読み取ります。最後に、データを細胞あたりの正規化蛍光として記録し、プロットします。3-チオフェンスルホンアミド化合物のデータは、化合物1Aと3BがそれぞれLuxR/HapRに対して異なる程度で阻害するのに対し、2Bは活性を持たないことを示唆しました。