ライブ3Dイメージングのためのヒトがん細胞株からの多細胞スフェロイドのハイスループット生成(英語)

3Dペトリ皿を鋳造するには、マイクロモールドを蒸留水ですすぎ、オートクレーブ用のオートクレーブ可能な容器に入れます。200ミリリットルのガラス瓶に入ったオートクレーブアガロース粉末に0.9%滅菌生理食塩水を加えます。.圧力が溜まらないように蓋を緩くねじ込み、ボトルを回転させてアガロースパウダーを混ぜます。

アガロース粉末を電子レンジで断続的に振とうしながら沸騰させます。アガロース溶液が冷えたら、溶融したアガロースをマイクロモールドにピペットで入れ、固まるまで待ちます。その後、マイクロモールドを慎重に曲げて3Dシャーレを取り出し、12ウェル組織培養プレートに移します。

3Dシャーレを平衡化するには、ウェルごとに2.5ミリリットルのMcCoy's 5A培地を追加し、摂氏37度と二酸化炭素5%で15分間インキュベートします。最終平衡化後、3Dペトリ皿の周囲と皿の内側にあるすべての培地を完全に取り出します。滴下して、40,500個の細胞を含む190マイクロリットルの細胞懸濁液を播種チャンバーに播種し、細胞を10分間沈殿させます。

3Dシャーレの外側に2ミリリットルのMcCoy's 5A培地を加え、摂氏37度と二酸化炭素5%でインキュベートします。4日後、スフェロイドは顕微鏡観察に十分なほどコンパクトになります。200マイクロリットルのコーティング溶液を96ウェルU底培養プレートの各ウェルに加え、1分間インキュベートします。

余分なコーティング液を取り除き、プレートを1時間乾燥させます。各ウェルに500個の細胞を含む200マイクロリットルの細胞懸濁液を観察し、摂氏37度および二酸化炭素5%で少なくとも4日間インキュベートします。