GFP標識ゼブラフィッシュT-ALL細胞のin vivo増殖と回収

まず、1ミリリットルの凍結GFP標識ゼブラフィッシュT-ALL細胞を含むバイアルを、摂氏37度の水浴で穏やかに振とうしながら解凍します。バイアルの内容物を15ミリリットルの円錐形チューブにゆっくりとピペットで入れ、氷上に4ミリリットルの魚培地を入れます。細胞を2, 500Gで摂氏4度で5分間スピンダウンし、上層部を廃棄してから、ペレットを0.5ミリリットルの魚培地に再懸濁します。

10マイクロリットルのトリパンブルー色素が入った微量遠心チューブに10マイクロリットルの細胞懸濁液を加えます。よく混合し、10マイクロリットルを血球計算盤に移し、顕微鏡で細胞をカウントします。次に、麻酔をかけた成体のCG1ゼブラフィッシュを腹側を上にして保持します。

ハミルトンマイクロシリンジを使用して、5〜6マイクロリットルの細胞懸 ?? 液を腹腔内に注入します。.移植後約21〜28日で、麻酔をかけたゼブラフィッシュのGFP標識白血病細胞の割合を評価します。白血病細胞を採取するには、安楽死させたゼブラフィッシュを新しいシャーレに移し、細胞の緩衝液として機能する1ミリリットルの魚培地を追加します。

カミソリの刃を使用して、最初にゼブラフィッシュの首を切り落とし、次に組織を浸軟させます。ピペットで上下に動かして、大きな細胞の塊を取り除きます。細胞懸濁液を40ミクロンの細胞ストレーナーに通して50ミリリットルの円錐管に通し、単一細胞懸濁液に解離します。