移植および腫瘍追跡のためのCT-FR染色ゼブラフィッシュT-ALL細胞の調製と選別

ドナープレートの調製のために、500, 000個の野生型CG1ゼブラフィッシュ細胞を15ミリリットルの円錐形チューブに移します。5ミリリットルの魚培地を加えて、細胞ストックを1マイクロリットルあたり100細胞に希釈します。50マイクロリットルの細胞懸濁液を96ウェルプレートの各ウェルに分注し、選別するまでプレートを摂氏4度に置きます。

ソーティング実験のセットアップ用に、汚れのない単一カラーコントロールを準備します。コントロールとサンプルの細胞懸濁液を35ミクロンのフィルターキャップに通し、氷上のファックスチューブに入れます。96ウェルプレートを摂氏4度で2, 500Gで遠心分離します。

各ウェルから45マイクロリットルの上清を慎重に取り除き、5マイクロリットルの液体を残します。20マイクロリットルのピペットで細胞を再懸濁し、ハミルトンマイクロシリンジを使用して、細胞懸濁液を必要な数のCG1ゼブラフィッシュに注入します。CG1ゼブラフィッシュに選別細胞を移植して限界希釈分析を行ったところ、CT-FR高細胞はCT-FR低細胞と比較して白血病幹細胞の頻度が4倍高かった。

移植後28日目のゼブラフィッシュの代表的な画像では、CT-FR高ゼブラフィッシュの89%が白血病を発症したのに対し、CT-FR低ゼブラフィッシュ群では20%でした。CT-FR高ゼブラフィッシュは、白血病に対する潜伏期間が有意に短かった。CT-FR高ゼブラフィッシュは、CT-FR低ゼブラフィッシュと比較して全生存率が有意に低かった。