hSATMVEC-脂肪細胞共培養によるCIED移植患者における細胞クロストークの検討

まず、1つのヒト白色皮下前駆細胞を経継を解凍し、12〜15ミリリットルの温かい前駆脂肪細胞増殖培地-2を含むT75フラスコに細胞を加えます。細胞が90%の密度に達した後、PBSで洗浄し、0.25%トリプシン-EDTA溶液1ミリリットルで2分間インキュベートします。光学顕微鏡を使用して、細胞の剥離を確認し、23ミリリットルのプレアディポサイト増殖培地-2を細胞に加えます。

1ミリリットルの細胞懸濁液を24ウェル共培養コンパニオンプレートの各ウェルに分注し、プレートをインキュベートして細胞のコンフルエンシーを達成します。次に、培地を1ミリリットルの前脂肪細胞分化培地と交換し、5%二酸化炭素と摂氏37度で10日間インキュベートします。分化の6日目に、トランズウェルインサート上の500マイクロリットルの完全なMVEC増殖培地に4つのヒトSAT MVECの累乗で5×10の種をまきます。

500マイクロリットルの完全MVEC増殖培地を含むウェルにインサートを置き、5%の二酸化炭素で摂氏37度でインキュベートします。10日目に、脂肪細胞が完全に分化したら、各ウェルから培地の半分を取り出し、コンフルエンスSAT MVEVを含むトランズウェルインサートを各ウェルに移します。プレートを24時間インキュベートして、共培養を行います。

ヒトの皮下白色前駆脂肪細胞の分化が進むと、脂質液胞の発達が見られます。