ハエサンプルから抽出したDNAの定性的および定量的分析

まず、DNA抽出キットを使用してハエのサンプルからDNAを抽出します。次に、マイクロプレートリーダーを使用してOD260とOD280の値を決定し、DNAの純度と核酸濃度を比較します。次に、2本の0.5ミリリットルの遠心分離管に190マイクロリットルの作業溶液を加えて、蛍光光度計の標準溶液を調製します。

次に、標準1と標準2のそれぞれ10マイクロリットルを作業溶液に追加します。チューブを少なくとも15分間光から遠ざけてください。0.5ミリリットルの遠心分離管で2マイクロリットルの試験DNAと198マイクロリットルの作業溶液を混合し、混合物を少なくとも15分間暗所に保ちます。

15分後、蛍光光度計の電源を入れ、dsDNA濃度測定、長距離設定を選択します。標準曲線を取得するために、標準1と標準2をテストします。次に、試験するサンプルをアッセイウェルに入れます。

DNAのスパイク量を2マイクロリットルに調整し、測定を行います。DNAを視覚化するには、まず20マイクロリットルのPCR増幅反応を設定します。チューブをサーマルサイクラーに入れ、PCRサイクルを実行します。

PCR後、製品を2%アガロースゲル電気泳動にかけます。次に、ゲルをゲルイメージングシステム上に置いて写真分析します。マイクロプレートリーダーによる抽出されたDNA純度の評価では、すべての新しいサンプルと古いサンプル1のOD260とOD280の比率が2を超えていることが示されました。

対照的に、古いサンプル2は低い比率を示しました。OD260 の読み取り値から得られた DNA 濃度は、新しいサンプルで最も高く、次に古いサンプル 1 で、古いサンプル 2 で最も低かった。電気泳動分析により、250〜400塩基対の範囲のバンドが明らかになり、古いサンプルと比較して、新しいサンプルでより顕著でした。