マウス脳組織切片の Ex Vivo 蛍光顕微鏡法

まず、最適な切断温度で保存された瞬間凍結ブレインを摂氏80度の貯蔵庫から取り出し、クライオスタットチャンバー内に置きます。サンプルをチャンバー温度まで温めます。片刃のカミソリを使用して、注射部位で脳を冠状に切断します。

最適な切断温度を少量使用して、サンプルを試料ディスクにマウントします。チャンバー内に冷やした重錘で十分な圧力を加えることで、サンプルを安定して取り付けることができます。マウントされたサンプルとサンプルディスクをサンプルヘッドに移動します。

20マイクロメートルの切片を取り、組織を希望の深さにトリミングします。目的の深さに達したら、クライオスタットを調整して、サンプルの5〜7マイクロメートルのセクションを取ります。次に、セクションを事前にラベル付けされたスライドガラスに取り付けます。

4%パラホルムアルデヒド中の切片を15分間固定します。固定後、このスライドをDPBSで3回すすぎます。DAPIを含む40マイクロリットルの封入剤をスライドに加えます。

メディウムの上にガラスカバースリップを慎重に置きます。蛍光顕微鏡下で、DAPIとCy5.5を使用して組織を視覚化します。腫瘍組織のex vivo蛍光顕微鏡法では、観察されたCY5.5蛍光シグナルにより、磁性ナノ粒子の送達が確認されました。