まず、マイクロピペットをマイクロピペットプーラーに挿入し、マイクロインジェクション針を引きます。解剖スコープの下で、針先をステージマイクロメータの分割に合わせます。マイクロメータを測定ガイドとして、鋭利な鉗子を使用して、針を細胞の直径よりわずかに大きい穴サイズに折します。
ピペットフィラーを装備した50ミリリットルのシリンジを使用して、針に鉱物油を完全に充填します。移植装置で、三方向ストップコックを回して、その長いアームがマイクロシリンジポンプに向くようにします。リザーバーシリンジプランジャーを押し下げて、油圧ラインからすべての気泡を洗い流します。
プランジャーに軽い圧力をかけたまま、3方向ストップコックを回して、長いアームがリザーバーシリンジに面するようにします。次に、気泡を起こさずに針をホルダーに挿入します。針が水平から10〜15度の角度でまっすぐ左を向くように針を調整します。
粗いマイクロマニピュレーターと細かいマイクロマニピュレーターを使用して、針先を顕微鏡の対物レンズの下に移動させ、ピントを合わせます。液体が針先に出入りしている場合は、オイルとRPTの間に安定した半月板が観察されるまで、シリンジポンプを使用して圧力を調整します。.オイルバブルが残っている場合は、針を右に動かして先端をRPTから引き出し、次に左に戻って再配置します。
ドナー動物が再び視界に入るまで、ステージを右に動かします。移植する細胞の中心を戻して焦点を合わせ、針を動物のすぐ外側の細胞に合わせます。次に、ドナー動物に針を挿入し、必要に応じてマイクロシリンジポンプで針先の油メニスカスを再安定させます。
針先を目的の細胞に当て、マイクロシリンジポンプで優しく吸引します。適切な細胞を採取した後、ドナーから針を取り外し、針先で材料を再安定させます。ステージを再配置して最初の宿主動物を視界に入れる/中央に配置し、細胞を配置する領域に焦点を合わせ、針を動物のすぐ外側のこの領域に合わせます。
次に、針を宿主動物に挿入し、針先のオイルメニスカスを再安定させます。針先を堆積部位に配置し、正しい数のドナー細胞が針から放出されるまで、マイクロシリンジポンプで穏やかな圧力をかけます。最後に、ホストから針を取り外します。
移植後12時間で、宿主の迷走神経核の前部領域にドナーニューロンが観察され、健康な神経突起の兆候が示されました。移植後2日で、移植されたニューロンは正しい位置に留まっただけでなく、新しい軸索を第4咽頭弓に向けて伸ばし始めており、宿主内での統合が成功したことを示しています。
