マウス骨髄細胞をHoechstで染色し、フローサイトメトリーによるサイドポピュレーション細胞の検出

まず、マウスから骨髄細胞を採取し、2ミリリットルの細胞懸濁液に1ミリリットルあたり5マイクログラムのHoechst 33342を加えます。ネガティブコントロールチューブも用意します。30分ごとに穏やかに攪拌しながら摂氏37度の水浴で90分間インキュベートしますインキュベーション後、細胞を氷上で5分間冷却し、次に摂氏4度で250Gで5分間遠心分離します。

2%FBSを含むHank's Balanced Salt Solutionを含むコールドランニング溶液に細胞を再懸濁します。再び摂氏4度で5分間遠心分離します。次に、得られた細胞ペレットをサンプルあたり500マイクロリットルの流水に再懸濁します。

フローサイトメトリー解析の前に、ヨウ化プロピジウム1ミリリットルあたり2マイクログラムの細胞を補充し、氷上に約5分間置きます。