まず、マイクロ波支援抽出用に希釈した60%溶媒を作業プラットフォームに置きます。コーヒーシルバースキンの0.67グラムを計量し、反応容器内で1つで20ミリリットルの抽出溶媒と30の割合で混合します。マグネチックスターバーを容器に追加して、サンプル内の熱と溶媒が均一に分布するようにします。
専用の工具で容器をしっかりと閉じ、マイクロ波補助抽出チャンバーに入れます。メソッドを設定するには、モニターのトップバーにあるツールボックスアイコンをクリックし、アクセサリセクションでSK eTローターを選択します。次に、攪拌をクリックして20%と入力し、攪拌速度を設定します。
ドアロックセクターをクリックし、摂氏80度を超える温度で作動するように設定します。次に、トップバーのテーブルアイコンをクリックし、温度勾配T1を抽出時間を10分に設定します。マイクロ波電力は1800ワット、温度は摂氏120度まで。
攪拌をアクティブにするには、攪拌ボタンをクリックして、緑色のライトが表示されるまで待ちます。ブロワーファンの速度をレベル3に設定します。抽出時間を保持するには、抽出時間を2分に、マイクロ波電力を1800ワットに、温度を摂氏120度に設定して、目的の抽出温度T15を選択します。
次に、画面の左下隅にある冷却ボタンをクリックして、10分の冷却時間を選択します。画面の右上隅にある[保存]アイコンをクリックします。使用する容器の数を選択して抽出プロセスを開始します。
抽出後、遠心分離機で9072gで4°Cで15分間抽出します。10ミリリットルのガラスピペットで上清を収集し、摂氏マイナス20度で保管します。コーヒーシルバースキン抽出物を96ウェルプレートの蒸留水で10倍に希釈します。
希釈したサンプル10マイクロリットルを希釈していないフォリン-シオカルテウ試薬20マイクロリットルと混合し、3分間反応させます。次に、100ウェルプレートの各ウェルの混合物に7.5%炭酸ナトリウム溶液を96マイクロリットル加えます。没食子酸の標準濃度範囲に対して、蒸留水で希釈することにより、異なる濃度を調製します。
それらを20マイクロリットルのfolin-ciocalteu試薬と混合し、3分間反応させます。次に、100ウェルプレートの各ウェルの混合物に7.5%炭酸ナトリウム溶液を96マイクロリットル加えます。反応を室温で暗所で30分間インキュベートします。
マイクロプレートリーダーで、反応混合物の吸光度を765ナノメートルで測定します。標準試料の濃度と765ナノメートルでの吸光度を使用して、標準試料の検量線をプロットします。結果をサンプルのグラムあたりミリグラムの没食子酸当量として表します。
水系1,2ヘキサンジオール抽出では、総フェノール含有量が最も高く、水抽出では最も低いフェノール含有量が得られました。1,2 ヘキサンジオール水抽出では、総フラボノイド含有量が最も高く、イソペンチルジオール水抽出では最も低いフラボノイド含有量が得られました。ヘキシレングリコール水抽出は最も高いDPPHアッセイ値を示し、エタノール水抽出は最も低い値を示しました。
水性ペンチレングリコール抽出は、ABTS アッセイ値が最も高く、水抽出は最も低い結果となりました。ヘキシレングリコール水抽出は最も高いFRAP値を示し、水抽出は最も低いことを示しました。
