In vitro組織研究のためのオルガノイドを得るためのヒト初代卵巣表面上皮細胞の単離

まず、ヒトの卵巣を0.9%塩化ナトリウム、または氷上の同様の滅菌生理食塩水で実験室に輸送します。ペトリ皿で新鮮な冷たい生理食塩水で卵巣をすすぎます。各卵巣を50ミリリットルの円錐管に移し、卵巣を覆うために2〜3ミリリットルの消化培地を追加します。

チューブをビーズバスに入れ、摂氏37度で30分間焼き戻します。次に、卵巣を10ミリリットルの収集培地を含む60ミリメートルのシャーレに慎重に移します。細胞スクレーパーを使用して、ヒト卵巣表面上皮細胞を含む卵巣表面を優しく擦ります。

スクレーパーを中程度で洗ってから、少なくともさらに2回こすります。収集培地中のヒト卵巣表面上皮細胞を15ミリリットルのチューブに移します。細胞を240Gで5分間スピンダウンします。

ペレットが赤血球による汚染を示す赤色を示している場合は、ペレットを1ミリリットルの赤血球溶解緩衝液に再懸濁します。.次に、カルシウムとマグネシウムを含むPBSを4ミリリットル加え、240Gで5分間遠心分離します。ヒト卵巣表面上皮細胞ペレットを将来の培養使用のために凍結保存します。