まず、大きなP200カットピペットチップを10ミリリットルのシリンジに取り付け、PBSを充填します。鉗子を使用して、安楽死させたマウスから分離された腸管の開口部に注射器の先端を挿入します。鉗子で腸の一部をシリンジに保持し、毎秒約50マイクロリットルの速度で穏やかに洗い流して内容物を取り除きます。
腸の内容物を空の計量ボートに集めます。次に、濡れた腸の部分を乾いたラベル付きのセルロース濾紙のストリップ上に直線に置きます。解剖ハサミを使用して、腸を腸間膜線に沿って縦方向に、一度に約5ミリメートルずつ切り開きます。
はさみの下端または一対の鉗子を使用して、切断した組織を濾紙の上に平らに置きます。次に、腸のセグメントの上に別の濾紙を置き、固定中に腸がカールしたり形が崩れたりするのを防ぎます。ティッシュを所定の位置に固定するには、ティッシュをホチキス止めしないように、濾紙の端をホチキス止めします。
組織を10%正常緩衝ホルマリンに浸します。腸の管腔側に触れている濾紙の上部をそっと取り除きます。鉗子を使用して、濾紙の底から腸を慎重に剥がしてから廃棄します。
次に、ティッシュをPBSで3回洗浄して、ティッシュからホルマリンを取り除きます。逆作用鉗子を使用して、管腔側を上にして短辺に沿って腸の一部を拾い上げ、鉗子を回して組織を転がします。ティッシュを乾いた計量ボートに置きます。
片手で鉗子で組織を所定の位置に保持します。逆作用鉗子を慎重に開き、組織を解放し、他の鉗子を使用して組織を逆作用鉗子から取り除きます。サイズ00の解剖ピンを組織に挿入します。
ワイヤーカッターを使用して、ピンの鋭い先端を取り外します。すべてのサンプルを巻いたら、4つのティッシュロールすべてを同じカセットに入れ、カセットをティッシュプロセッサーに挿入します。埋め込みステーションで、少量のパラフィンを型に入れます。
4つのスイスロールをカセットから取り出し、できるだけ平らに置いて、個々の型に入れます。型を埋めるためにパラフィンを追加します。金型をコールドプレートに移動し、すべてのスイスロールが金型の底に平らになっていることを確認します。
ラベルの付いた小さなカセットトップを型に置きます。ワックスが固まったら、ブロックを型から取り出します。
