まず、大きなスライドボックスを取り、フタに付着した段ボールカバーを取り外して、加湿チャンバーを準備します。広告を置きますamp ペーパータオルをスライドボックスのベースに垂直に置き、平らになるようにします。脱パラフィン、再水和、抗原賦活化、および洗浄による染色用のスライドを調製します。
スライドをPBSから取り外し、ティッシュを避けながら余分なPBSを拭き取ります。疎水性ペンで、ティッシュの周りに箱を描き、バリアを形成します。広告の上にアウトラインスライドを水平に置きますamp ペーパータオル。
組織を覆うために約100マイクロリットルのブロッキングバッファーを追加します。加湿チャンバーを閉じ、スライドを室温で90分間インキュベートします。次に、ブロッキング溶液を軽くたたいます。
直ちに調製したマウスオンマウスブロックを組織を覆うように追加し、室温で15分間インキュベートします。インキュベーションの終了時に、スライドを加湿チャンバーから取り出し、PBSに浸したスライドラックに直接置きます。次に、PBSからスライドを削除します。
余分なPBSをそっと軽くたたいて、加湿チャンバーに水平に戻します。適切に希釈した目的の一次抗体を添加して、組織を覆います。スライドを加湿チャンバーから取り出したら、一次抗体を静かにタップオフし、スライドをPBSに浸したスライドラックに5分間置きます。
PBSからスライドを取り外し、余分なPBSを軽くたたいた後、加湿チャンバーに水平に戻します。適切に希釈した二次抗体蛍光色素または目的の標識一次抗体を添加して、組織を覆います。次に、適切に希釈したHuistを組織に直接加えてから、暗所で室温でインキュベートします。
その後、スライドをPBSで満たされた新しい耐溶剤性皿に5分間暗闇で置きます。一度に 1 つのスライドを削除し、残りのスライドを暗闇で PBS に沈めたままにします。余分なPBSを取り除いた後、組織の中央に1〜2滴の退色防止用封入剤を添加します。
きれいなカバースリップの端を持ち、45度の角度でゆっくりとスライドに下げます。ティッシュの中央から始めて、2本の指でカバースリップをそっと押し下げます。カットされたろ過されていないP200ピペットを、真空に接続された血清学的ピペットの先端に取り付けます。
カバースリップの端に続いて、バキュームを使用して余分な封入剤を取り除きます。新しいスライドボックスに、スライドを水平に平らに置き、室温で暗闇で乾かします。顕微鏡画像は、さまざまな腸セグメントの形態と杯細胞の染色を示しました。
頂端膜、上皮細胞の側膜、および核。腸の免疫蛍光染色では、増殖細胞、間質、リソソームドメイン、上皮など、多くの異なる細胞コンパートメントが強調表示されました。
